產(chǎn)品描述
本試劑盒可以快速從細胞、細菌和部分動物組織中提取高質(zhì)量的總 RNA，不使用酚和氯仿等有毒物質(zhì)。試劑盒中裂解液（Lysis Buffer）含有強變性劑和 RNA 酶抑制劑，能夠迅速裂解樣品并失活 RNA 酶，確保操作過程中 RNA 的完整性。提取得到的總 RNA 可用于 RT-PCR、qPCR、Northern blotting、cDNA 文庫構(gòu)建等多種實驗。整個提取過程僅需 10 min，操作簡單快速、穩(wěn)定性高。本試劑盒僅適用于部分組織類型，包括肝臟、腸、腦、脾臟和柔軟的腫瘤組織，不適用于肺、心臟、皮膚、骨骼、肌肉等堅韌的組織。
訂購信息

產(chǎn)品組分

◆Wash Buffer使用前請加入48ml無水乙醇，搖勻后使用。

運輸與保存
常溫運輸。常溫保存，有效期12個月。
使用方法
一、 樣品裂解
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞
(1) 移除培養(yǎng)基，PBS洗一次；
(2) 在培養(yǎng)板中加入500 μL的Lysis Buffer (＜3×10^6個細胞)，水平放置片刻，再用槍頭吹吸或攪拌數(shù)次，直至細胞裂解。轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，用力反復(fù)吹打數(shù)次，充分裂解直到看不到細胞團為止，然后進行步驟二；注：(1) 細胞樣品建議用6孔板或35mm培養(yǎng)皿培養(yǎng)細胞，培養(yǎng)至合適的密度進行 RNA提取 (24孔板培養(yǎng)的細胞培養(yǎng)至90%以上的細胞密度也可使用)。 (2) 不方便直接裂解的培養(yǎng)容器，可以使用細胞刮刮下細胞或
者消化后，將細胞收集到離心管中。 (3) 對于T細胞/B細胞等體積很小、RNA含量很低的細胞，建議增加細胞數(shù)到至少1×10^6以上。
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞
(1) 取1~3×10^6個細胞的懸液至1.5 mL離心管，1000 g離心1 min收集細胞；
(2) 去上清，加入500 μL的Lysis Buffer，用力吹吸10次，vortex 10 s，保證細胞裂解，看不到細胞團，
然后進行步驟二。
3. 細菌細胞
5,000 rpm離心3 min收集適量的菌體(＜5×10^8)，棄去上清，加入100μL含有的TE buffer，吹打混勻，室溫靜置孵育數(shù)分鐘。加入500 μL的Lysis Buffer，劇烈振蕩20 s，12,000rpm離心1~2 min，取上清，然
后進行步驟二。
4. 動物組織（適合腸、肝、腦、脾、腫瘤，不適用肺、心、皮膚等堅硬組織）
(1) 勻漿器勻漿：切取新鮮組織10~50mg至1.5 mL離心管中，加入500 μL的Lysis Buffer，用組織勻漿機勻漿組織，直至無肉眼可見的組織塊。12,000 rpm離心1~2 min。
(2) 液氮研磨：在液氮中將10~50mg組織充分研磨，將研磨成粉的樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，加入加入500 μL的Lysis Buffer，劇烈振蕩20 s，12,000rpm離心1~2 min。
(3) 轉(zhuǎn)移不超過400μL上清至新離心管中。切勿吸取管底沉淀和泡沫。
二、RNA提取
1. 細胞樣品
較精確估計裂解液體積，向細胞裂解液中加入等體積的無水乙醇，將離心管劇烈顛倒幾次，或用移液器用力吹吸數(shù)次，充分混勻，然后將液體轉(zhuǎn)移至離心柱上，進行步驟3。【注】：可能會產(chǎn)生沉淀,這是正常現(xiàn)象，不影響提取過程，繼續(xù)后續(xù)操作。
2. 組織樣本
較精確估計裂解液體積，向裂解液中加入0.5倍體積的無水乙醇（或等體積的70%乙醇），將離心管劇烈顛倒幾次，或用移液器用力吹吸數(shù)次，充分混勻，然后將液體轉(zhuǎn)移至離心柱上。
3. 7,000 rpm離心1 min（如離心柱上仍有液體殘留可增加轉(zhuǎn)速至12,000 rpm）,棄廢液。
4. 向RNA柱中加入500 μL的Wash Buffer，12,000 rpm離心1 min。
5. 倒掉廢液，將RNA柱裝回收集管，12,000 rpm空管離心1 min，去除殘留的Wash Buffer。
6. 取出RNA吸附柱，放入一個RNase-free的1.5mL離心管中，開蓋晾干1 min。向RNA柱的膜中心部位加入25~50uL的Elution buffer，室溫靜置1 min。
7. 12,000 rpm離心1 min。樣品可長期保存至-80℃?！咀ⅰ浚杭酉疵撘后w積不應(yīng)少于25uL，否則會影響回收率，為了獲得更大濃度的RNA，可將離心的RNA溶液重新加入到吸附柱，重復(fù)洗脫一遍。
注意事項
1. 本產(chǎn)品于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 加入Lysis Buffer后，一定要充分振蕩，保證RNA提取的效果；如果混合液非常粘稠難以轉(zhuǎn)移，明顯樣品量過多，增加Lysis buffer用量或減少樣本用量。
3. 細胞或組織裂解產(chǎn)物，上柱前需要加入無水乙醇，充分混勻之后加入離心柱離心。
4. 使用的樣本避免反復(fù)凍融，以免影響RNA的產(chǎn)率和質(zhì)量。
5. 關(guān)于RNA純度：OD260/OD280和 OD260/OD230比值是衡量 RNA 純度的指標，高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280的值在1.9-2.2之間，OD260/OD230大于 1.8（比較純凈的比值大于2.0）。本試劑盒提取RNA，使用Nanodrop等微量分光光度計測定OD 260/280在1.90~2.2之間，OD260/230在2.0~2.2之間均屬
正常。

6. 關(guān)于DNA微量殘留：在總RNA提取過程中，通常無法避免基因組DNA的微量殘留。使用本試劑盒，由于結(jié)合了獨特的緩沖液體系和高特異性吸附膜，獲得的總RNA中DNA殘留量較少，對大多數(shù)qPCR擴增過程影響不大。如果實驗對基：因組DNA殘留較為敏感，建議采取以下措施：①DNase!處理：在后續(xù)步驟中使用DNasel酶消化基因組DNA。②優(yōu)化引物設(shè)計：選擇跨內(nèi)含子的引物或設(shè)計在基因組DNA和cDNA上擴增產(chǎn)物大小不同的引物對，以避免DNA作為模板參與擴增反應(yīng)。

相關(guān)產(chǎn)品推薦
總RNA提取試劑盒（trizol）（貨號：AN51L758）
RNA提取輔助試劑(氯仿替代物)（貨號：AN51L677）

本產(chǎn)品于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。